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技術文章

恒遠生物|細胞復蘇

點擊次數:460   發布時間:2024/3/21 10:03:20

細胞復蘇的原則
 
快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
 
一. 實驗準備:
 
1.將水浴鍋預熱至37℃
 
2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
 
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等。
 
二.取出凍存管:
 
1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
 
2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。
 
三.迅速解凍:
 
1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。
 
2.約1-2min后凍存管內液體溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。
 
四.平衡離心:
 
用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min 
 
五.制備細胞懸液:
 
1.吸棄上清液。
 
2.向離心管內加入10ml培養液,吹打制成細胞懸液。
 
六.細胞計數:
 
細胞濃度以5×105/ml為準。
 
七.培養細胞:
 
將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液時間由細胞情況而定。
 
特別注意初學者常犯的錯誤:
 
1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
 
2.水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。
 
3.離心忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。
 
4.一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。

原創作者:上海恒遠生物技術發展有限公司

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